Méthodologie du clonage moléculaire

Pour maîtriser le clonage moléculaire, il est essentiel d’en comprendre les étapes clefs, depuis la préparation de l’ADN jusqu’à l’expression de la protéine d’intérêt.

Nous allons suivre la logique expérimentale complète d’un projet de clonage moléculaire, depuis l’obtention du matériel génétique jusqu’à la production de la protéine recombinante.
Nous verrons d’abord comment purifier un ADN de qualité avant de détailler les stratégies expérimentales à adopter selon les objectifs du clonage. Ensuite, nous présenterons les méthodes classiques de clonage, basées notamment sur les enzymes de restriction et la ligase. Puis les méthodes modernes de clonage qui ont révolutionné le domaine depuis les années 2000. Nous verrons comment la transformation bactérienne permet d’introduire l’ADN recombinant dans un hôte, suivi des étapes cruciales de sélection, criblage et validation des clones. Enfin, nous terminerons par l’expression des protéines recombinantes, étape ultime qui donne tout son sens au clonage moléculaire.

METHODOLOGIE EXPÉRIMENTALE

• Purification
• Stratégie expérimentale
• Méthode classique de clonage
• Méthodes modernes de clonage
• La transformation bactérienne
• Validation des clones
• Expression des protéines recombinantes