Les phosphatases
Définition
Les phosphatases sont des enzymes qui catalysent l'hydrolyse de liaisons phosphoesters, permettant l'élimination de groupements phosphate à partir de molécules simples ou macromolécules (acides nucléiques, protéines par exemple).
Phosphatases utilisées en laboratoire
Les phosphatases sont des enzymes qui catalysent l'hydrolyse de liaisons phosphoesters, permettant l'élimination de groupements phosphate à partir de molécules simples ou macromolécules (acides nucléiques, protéines par exemple).
Les phosphatases sont des outils essentiels du clonage d'ADN. Elles permettent de diriger la ligation, en déphosphorylant les extrémités 5'-phosphate (5'-P) des plasmides. Le plasmide ne peut plus se recirculariser mais il peut être ligué à un insert phosphorylé.
La CIP
La CIP (Calf Intestinal Phosphatase) est une phosphatase d'origine intestinale bovine.
Elle est très efficace mais difficile à éliminer (avec une extraction phénol/chloroforme) ce qui limite son utilisation en laboratoire malgré sa très bonne efficacité.
La SAP et SAPr
La SAP (Shrimp Alkaline Phosphatase) est thermosensible donc plus facile à inactiver par chauffage.
Sa version recombinante (SAPr) est aujourd'hui la plus couramment utilisée en laboratoire en raison de sa bonne efficacité et de sa facilité d'inactivation.
